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PCR實驗室設計的基本原則
PCR實驗室廣泛應用于生物學各個領(lǐng)域,例如:艾滋病檢測,乙型肝炎,禽疫病,癌基因的檢測和診斷,DNA指紋,個體識別,親子鑒定及法醫(yī)物證等等,今天為大家進行詳解PCR實驗室設計的基本原則。
一、PCR實驗室布局設計
PCR實驗室原則上為試劑準備區(qū),樣品制備區(qū),擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域,并設有專用走廊,各工作區(qū)域應設緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)應是分隔獨立的,各工作區(qū)有明顯的標志,不能直通,如果緊密連接,需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴增前區(qū),后兩區(qū)為擴增后區(qū),即從:試劑準備區(qū)一樣品制備區(qū)一PCR擴增室一產(chǎn)物分析室,不得逆向流動。實驗室的氣流也應從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),不得逆向流動。各工作區(qū)頂部應該安裝紫外燈,紫外燈波長為254mm,每20m一支40W的紫外燈。
二、實驗室功能區(qū)設計及主要設備
1.試劑準備區(qū):主要進行試劑的制備,分裝和主反應混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。本區(qū)主要設備有天平,冰箱,離心機,加樣器,振蕩器等。對于氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴格的要求,一般為+10Pa。
2.樣品制備區(qū):主要進行樣品的保存,核酸提取,貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區(qū)主要設備有冰箱,生物安全柜,離心機,加樣器,振蕩器等。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染,一般為+10Pa.
3.擴增區(qū):主要進行DNA擴增。此外,已制備的DNA模板(來.自樣品制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑準備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)主要設備有:擴增儀,冰箱,離心機,加樣器等。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶從本區(qū)漏出一般為一25Pa。
4.擴增產(chǎn)物分析區(qū):擴增產(chǎn)物的測定。本區(qū)主要設備有酶標儀,洗板機、加樣器和水浴箱等。本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,一般為一25Pa,以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。
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